그림 3은 대규모 항원 정제의 예를 보여줍니다 항 -HBS 항체는 세포 핀 포르 실에 고정되어 HBS (B 형 간염 표면 항원)가 고순도 및 고수성에서 정제 될 수있게 하였다 하중량은 3,000l의 혈장을 초과했으며 30 개월 이상 사용 후에도 유의하게 악화되지 않았으며, 항원은 매우 안정적으로 정제되었다

리간드-면역화 된 담체를 합성하기 위해, 45L의 항 -HBS 항체를 운반하는 말 혈청을 암모늄 황산염 침전에 의해 농축시켰다 그 후, 완충액을 02M 인산 (pH 7) 및 01m NaCl로 대체 하였다 이 절차에서 수득 된 항체를 함유하는 혈청을 12 L의 세포 핀 포르 실과 반응시켰다 그 후, 80g의 나트륨 시아 노보로 하이드 라이드를 환원제로 첨가하고 4 ℃ 내지 8 ℃에서 24 시간 동안 반응하여 캐리어에 공유 결합을 허용 하였다 생성 된 리간드 면역화 된 캐리어를 사용한 완충제로 세척 한 다음 컬럼에 포장 하였다
12393_12450

그림 도 4는 당 단백질 RCA (Ricinus communis agglutinin)를 정제하기 위해 셀 핀 포르 실에 렉틴 (Concanavalin A = CONA)을 고정시킨 예를 보여준다 1 ml의 01m 아세테이트 완충액 (pH 64), 1 mM mgCl2, 1 mM mnCl2, 1 mM CaCl2 및 메틸 α-d- 매노 노 사이드를 함유하는 용액에 50 mg의 Con A를 현탁시킴으로써 리간드 샘플을 용해시켰다 리간드 샘플을 05 g (습식 캐리어)의 세포 페인 포르밀에 첨가하고 4 ℃에서 밤새 반응시켰다 그 후, 나트륨 시아 노보로 하이드 라이드를 첨가하고, 혼합물을 4 ℃에서 밤새 반응하여 공유 결합을 허용 하였다

포르 실 그룹 (Aldehyde Group)은 세포 핀 포르 실에 고정화 된 단백질의 1 차 아미노 그룹과 함께 쉬프베이스를 형성한다 이어서, Schiff베이스는 환원제 (나트륨 시아 노보로 하이드 라이드, 나트륨 붕소 하이드 라이드 등)를 사용하여 감소하여 강한 공유 결합을 생성한다 표 2는 일반적인 고정 방법을 설명합니다

Celfineformyl은 리간드에 안정적으로 공유 결합하기 위해 환원제가 필요합니다 환원제를 선택할 때, 우리는 단백질 리간드를 비활성화하지 않는 환원제를 권장합니다 나트륨 보로 하이드 라이드 (NABH₄), 나트륨 시아 노보로 하이드 라이드 (NACNBH₃), Trimethylaminoborane ((ch₃)₃1버퍼의 pH 또는 이온 강도가 변경 되더라도 모양이 변하지 않습니다₃)는 사용 이력이 많고 사용하기에 적합한 환원제입니다 모든 환원제는 10 mg/g 미만의 습식 캐리어와 함께 사용할 수 있습니다 환원제의 양과 관련하여, 리간드 누출 및 활성 속도의 양을 고려하면서 리간드의 최적 조건을 검색해야한다

셀 핀 포르 릴에서 리간드의 고정화는 빠른 반응을 유발한다 그러나, 리간드가 불안정한 기능성 단백질로 만들어지면 단백질 불 활성화를 방지하기 위해 가벼운 반응 조건을 배치해야합니다 단백질 활성을 지표로 사용하여 최적의 반응 조건을 결정함으로써, 우수한 리간드-면역화 된 담체를 합성 할 수있다 반응 동안의 파라미터는 pH 조건, 반응 시간 및 반응 온도를 포함한다

커플 링 효율 (전하량에 대한 고정 리간드의 양) 및 고정화 된 리간드의 양 (캐리어 상에 고정화 된 리간드의 농도)은 리간드 농도, pH, 반응 온도 및 반응 시간에 따라 쉽게 조정될 수있다 산업 규모로 사용될 때 더 나은 고정화 반응 조건을 탐색함으로써 비용 효율적인 프로세스를 구성 할 수 있습니다