1뉴스 레터 구독1jp인산염
mRNA 약물의 신타 제인 T7 RNA 폴리머 라제와 같은 핵산-결합 단백질의 정제를 위해
Celfine Phosphate는 효소 및 핵산 결합 단백질에 대한 친 화성 활성을 갖는 크로마토 그래피 충전제이다 포스페이트 그룹은 구형, 매우 기계적으로 강한 셀룰로오스 입자에 고정됩니다
| 기능 | |
|---|---|
| 기본 캐리어 | Cellulose |
| 리간드 | 인산염 그룹 |
| 리간드 농도 | 03-08meq/ml |
| 단백질 흡착량 | ≧ 20mg/ml-gel (Lysozyme) |
T7 RNA 폴리머 라제의 정제의 예T7 RNA 폴리머 라제의 정제
T7 RNA 폴리머 라제는 시험 관내 전사 합성에서 주형 DNA로부터 mRNA를 합성하는 데 사용되는 매우 중요한 RNA 신타 제이다
Cellfine Max Deae로 정제 한 후, 셀 핀 Fosfate로 정제됩니다 T7 RNA 폴리머 라제는 적색으로 표시된 EL2 분율로 축적된다
| fraction | 효소 활동 (단위/단백질) |
효소 활동 회복 속도 (%) |
단백질 회복 (%) |
| 로드 샘플 | 94043 | 100 | 100 |
| 분수 이해 | 2763 | 1.8 | 59.8 |
| 용리 된 분수 | 267034 | 70.2 | 24.7 |
Celfine 표 1은 인산염으로 컬럼 정제 후 효소 활성 및 단백질 회복 속도를 보여줍니다 (그림 1)
1 : Lysate, 2 : 암모늄 설페이트 침전, 3 : Cellfine Max Deae 용리 분율, 4 : 셀 피네 포스페이트 용리 분획, 5 : 상업적 대조군
정제 정도는 Cellfine Max Deae 및 Cellfine Fosfate 정제 과정으로부터 얻은 분획을 사용하여 SDS-PAGE에 의해 평가되었다
셀프 핀 포스페이트의 기공 특성
CIP 안정성CIP 안정성 테스트
Celfine Phosphate는 안정적이며 02m NaOH 수용액에서 반복적으로 사용할 수 있습니다
운영 조건
- 열
- 16x10cm (20ml)
- 유속
- 3ml/min (90cm/h)
- 샘플
- 75mg rusa d70n (헤파린-면역화 된 캐리어의 정제 후 샘플)
- 그라디언트
- 200ml, 01M → 13M NACL에서 50mm tris-HCL pH 80
SDS-PAGE
- gel
- Novex 4-12%BT 겔 MES-SDS 런닝 버퍼 (Invitrogen)
- 레인 정보
- 1 세포 제거 후 추출
2 헤파린 면역화 된 캐리어에 대한 흡착되지 않은 분획
3 헤파린 면역화 된 캐리어 흡착 분획 RUSA
4-6 셀 핀
7 Rusa Pure Sample
8 마커 12 MW 표준 (Invitrogen)
참조
Nucleic Acids Research, 2006, vol 00, No 00 1–8
Rachel MacMaster, Svetlana
9기술 칼럼
이 데이터는 Sheffield의 Svetlana Sedelnikova 박사의 예의에 의해 수행되었습니다
단백질 분리 특성
Celfine Phosphate는 염 농도를 변화시켜 단백질 분리를 허용합니다 그것은 양이온 교환기처럼 작동하지만 전형적인 양이온 교환기보다 높은 소금 농도에서 용출하는 경향이 있습니다
- 열
- ID 11 cm - H 10 cm
- 유속
- 2 ml/min (126cm/h)
- 밸런싱 버퍼
- 001M 아세테이트 완충, ph48
- 용리 버퍼
- 0 → 1 mol/l NaCl Gradient
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